UJI KUALITATIF PROTEIN

Protein termasuk dalam senyawa yang terpenting dalam organisme hewan. Sesuai dengan peranannya protein berasal dari kata proteos yang artinya pertama. “Protein” adalah poliamina dan jika dihidrolisis protein menghasilkan asam-asam amino hanya 20 asam amino yang ;azim kita temui dalam protein tumbuhan dan hewan. Namun kedua puluh asam amino ini dapat dihubungkan dengan berbagi cara membentuk otot, enzyme, dan lainya. Asam-aam amino yang terdapat pada protein adalah asam α-aminokarboksilat. Variasi dalam struktur monomer-monomer ini terjadi dalam rantai samping. Asa amino tidak selalu bersifat seperti senyawasenyawa organic. Titik leleh diatas 200oC, sedangkan kebanyakan senyawa organic denga bobot molekul sekitar itu berupa cairan pada temperature kamar, asam amino larut dalam pelarut air dan organic, tetapi tidak larut dalam pelarut nonpolar. Asam amino memiliki moment dipole yang besar, juga mereka bersifat kurang asam dibandingkan sebagian besar asam katrboksilat dan kuarang basa dibandingkan sebagian besar senyawa amina yang lain (Fessenden, 1989: 363-364). Beberapa jenis protein sangat peka terhadap perubahan lingkungannya. Suatu protein memiliki arti bagi tubu apabila protein tersebut di dalam tubuh dapat melakukan aktivitas biokimiawi yang menunjang kebutuhan tubuh. Aktivitas ini banyak mengandung struktur dan konformasi protein yang tepat. Apabila konformasi protein berubah, misalnya karena perubahan suhu, pH atau karena reaksi denga senyawa lain, ion-ion logam maka aktivitas biokimianya akan berkurang. Enzim merupaka suatu contoh protein memiliki aktifitas katalis reaksi di dalam tubuh. Ion logam berat yang masuk ke dalam tubuh akan bereaksi dengan sebagian enzim di

dalam tubuh, sehingga menyebabkan koagulasi atau pengumpalan (Poedjiadi, 1994: 118). Peptide sederhana mengandung dua, tiga, empat, atau lebih residu asam amino, masing-masing disebut dipeptida, tripeptida, tetrapeptida, dan seterusnya. Peptide didapatkan dari hidrolisis rantai panjang suatu polipeptida (protein). Sebagaimana asam amino, peptide memiliki pH isolistrik (pHI). Reaksi kimia peptide disebabkan karena adanya gugus junh –NH2, R, dan –COOH. Seperti pada asam amino, gugus -NH2 pada peptide dapat direaksikan dengan 2,4 dinitrofenil florobenzene fenilisotianat dan gugus –COOH. Dapat diesterfikasi dengan dan direduksi. Caa reaksi berwarna yang lain untuk pepetida dan protein tetapi tidak untuk asam amino bebas, adalah reaksi biuret. Reaksi ini terjadi antara pepetida atau protein dengan CuSO4 dan alkali, yang menghasilkan senyaw kompleks berwarna ungu (Wirahardikusumah, 2008: 25-26). Protein merupakan sebagian besar menu makanan manusia hamper semuanya berasal dari proten biji, khususnya dari tanaman serealia seperti padi, gandum, dan jagung. Slah stu tumbuhan yang memiliki kandungan protein adalah Medicagu sativa l. Protein disini dapat dianalisa secara kualitatif dengan metode sederhana sepet buret, xantoprotein, dan sebagainya (Parman, 2007: 38). C. ALAT DAN BAHAN. 1. Alat-alat. o Tabung reaksi. o Pipet tetes. o Gelas kimia o Pemanas Air. 2. Bahan-bahan. o Aquadest o ZnSO4 encer o CuSO4 o HgCl2 o H2SO4 pekat o HNO3 pekat o NH3 o CH3COOH 1 N

o NaOH 40% o CuSO4 0,5% o Reagen Molish. D. PROSEDUR KERJA. 1. Persiapan Larutan Protein. Telur Diambil putihnya Diencerkan hingga 100mL Larutan protein 2. Uji protein dengan Pengendapan. a. Pengendapan Dengan Logam Berat. Larutan Protein. + ZnSO4/HgCl2/CuSO4 Mengendap Dibagi dua Endapan 1 + ZnSO4/HgCl2/CuSO4 Hasil 1 b. Pengendapan oleh Asam. 3 mL HNO3 pekat + 3 mL Larutan protein. Amati Hasil 5 mL Larutan Protein. + 2 tetes CH3COOH 1N ∆ (pemanas air 5 menit) Hasil Hasil 2 Endapan 2

3. Uji Warna Protein. a. Reaksi Biuret. 3 mL Lautan Protein. + 1 mL NaOH 40% + 1 tetes CuSO4 Warna Ungu b. Reaksi Xantoprotein. 3 mL Larutan Protein + 1 mL HNO3 Pekat Endapan ∆ (air mendidih) Larutan Kuning Didinginkan Dibagi 2 tabung. Tabung 1 Hasil 1 c. Reaksi Molish. 1 mL Larutan Protein. + 2 tetes α-Naftol Dikocok + H2SO4 pekat Terbentuk 2 Lapisan (Cincin Ungu) E. HASIL PENGAMATAN. 1. Uji Pengndapan dengan Ion Logam. NO 1. 2. Zn Ion Logam
2+

Tabung 2 + Amoniak Hasil 2

Hasil Pengamatan Tabung 1 larutan putuh keruh Endapan lebih banyak. – Larutan putih keruh. Tabung 2 – Putih Keruh

Cu 2+

- Larutan semakin pekat

3.

Hg 2+

- Larutan bening – Endapan semakin Banyak

- Larutan keruh – Endapan belum terbentuk

2. Pengendapan dengan Asam. NO 1. Jenis asam HNO3 Pekat Hasil Pengamatan – Terbentuk tiga lapisan, atas putih keruh, Hijau, bawah Bening, Setelah di kocok endapan Kuning, Berbau Menyengat. 3. Uji Warna Protein. NO 1. 2. Nama Reaksi Reaksi biuret Reaksi Xantoprotein Hasil Pengamatan. + NaOH = Larutan Bening. + CuSO4 = Larutan Ungu + HNO3 pekat = Endapan putikh kekuning-kuningan. ∆ = Endapan kuning menggumpal. Tabung 1 = warna tetap kuning Tabung 2 = lebih kuning dari T1. 3. Reaksi Molish + α-naftol = Putih Keruh + H2SO4 = membentuk 2 lapisan, bawah hijau, atas endapan putih. F. ANALISIS DATA. 1. Persamaan Reaksi. a. Reaksi Protein dengan Ion Logam.
O O Protein R R O HN NH + M HN NH R O

b. Pengndapan dengan Asam.
Protein

Protein padat

c. Reaksi Biuret. 2Cu2+ + 2OHCuO(s) + H2O
O O Protein R R O HN NH 2+ Cu HN NH R O

Cu

2+

d. Reaksi Xantoprotein.

Uji Xantoprotein merupakan uji kualitatif protein yang  positif untuk protein yang mengandung asam amino dengan inti benzen, misalnya tirosin, triptofan, dan fenilalanin. Pada uji Xantoprotein ini, larutan asam nitrat pekat ditambahkan dengan hati-hati ke dalam larutan protein. Setelah dicampur terjadi endapan putih yang dapat berubah menjadi kuning apabila dipanaskan. Reaksi yang terjadi ialah nitrasi atau reaksi substitusi atom H pada benzena yang terdapat pada molekul protein oleh gugus nitro.

Gambar 149. Reaksi yang terjadi pada uji Xantoprotein

 

e. Reaksi molish.
OH R H2N NH O OH H2SO4 H2N NH O R OH O O OH

H2N NH O OH
+

OH

H2N NH R OH

warna ungu

G. PEMBAHASAN. Protein merupakan unit penyusun utama tubuh. Protein juga merupakan suatu polimer yang mempunyai monomer suatu asam amino. Asam amino sendiri merupakan senyawa kimia yang mengandung 2 gugus fungsi yang berbeda. Maka dari itu reaksi identifikasi suatu protein tidak jauh dari reaksi kedua gugus fungsi tersebut. Salah satu identifikasi protein adalah dengan cara denaturasi protein (perubhan struktur protein. Denaturasi protein ini dapat dilakukan dengan penambahan asam atau ion logam berat (Poedjiadi, 1994). Pada praktikum kali ini kita melakukan pengendapan dengan penambahan ion logam Zn, Cu, dan Hg. Masingmasing menghasilkan endapan pada larutan protein. Dari semua ion logam, Hg mengendapkan cukup banyak protein dari pada ion logan lainya. Hal ini disebabkan karena kosentrasi larutan HgCl2 yang digunakan lebih besar dari yang lain. Selain itu Hg merupakan logam berat. Pada dasarnya semua ion logam ini akan menghasilkan gumpalan (endapan) pada larutan protein Karena ion logam ini akan membentuk kompleks dengan protein dengan adanya gaya tarik antara gugus –NH- dengan ion logam yang bermutatan positf.. Sedangkan untuk pengendapan dengan menggunkan asam, kita hanya melakukan pengandapan menggunakan asam nitrat pekat. Hasil yang didapat berupa endapan kuning setelah langsung di tambahkan asam nitrat pekat hal ini karena protein mengalami denaturasi dengan dengan cara nitritasi pada gugus aromatiknya. Selain itu juga aam juga merubah struktur protein dengan cara memberikan H+ pada gugus –NH- sehingga membentuk –N+H2- . Dalam pengujian protein elanjutnya dengan cara reaksi warna pada protein dengan cara penambahan reagen tertentu. Reaki yang dilakukan pada praktikum ini meliputi : reaksi biuret, reaksi xantoprotein, dan reaksi molish. Pada percobaan reaksi biuret hasil yang didapat sedikit keruh dan larutan berwarna . kekeruhan itu karena Cu2+ direduksi oleh protein menghasilkan endapan Cu2O, dan warna ungu bini di sebabkan terbentuknya kompleks Cu2+ denga protein pada gugus asilnya. Untuk selanjutnyaadalah uji protein dengan reaksi xantoprotein. Reaksi ini diawali dengan penambahan HNO3 pekat pada larutan protein hasil yang terbentuk berupa endapan kuning, setelah dipanaskan padatan tersebut menjadi larutan kuning. Reaksi ini merupakan reaksi nitritasi pada gugus aromatic. Pada reaksi ini juga terbentuk warna lebih kuning pada setelah di tambahkan dengan amoniak, hal ini

karena reaksi nitritasi pada protein semakin banyak terjadi. Uji ini positif pada protein yang mengandung asam amino tirosin, fenilalanin, dan triftofan. Untuk selanjutnya yaitu penguiian reaksi warna dengan reagen molish yaitu α-naftol. Hail dari uji ini adalah terbentuknya cincin ungu. Cincin unggu ini merupakan hasi kondensasi furfural atau m-furfural dari karbohidrat yang terkandung di dalam putih telur. Selain itu juga terjadi reaksi pada gugus asil protein dengan αnaftol, dan setelah di tambahkan H2SO4 hasil reaksi tersebut menjadi ion karena adanya penambahan ion H+. H. KESIMPULAN. Dari hasil pengamatan, analisa dat, dan pembahasan dapat disimpulkan sebagai berikut : 1. Pengendapan protein dapat dilakukan dengan 2 cara yaitu penambahan ion logam dan penambahan asam. 2. Penambahan asam menghasilkan endapan lebih banyak. 3. Uji kualitatif protein dapat dilakukan dengan cara penambahan reagen-reagan tertentu seperti biuret, HNO3, dan molish. 4. Pada uji warna dengan biuret didapatkan hasil positif dengan terbentuknya padatan merah bata (Cu2O), dan dan larutan ungu (kompleks protein dengan Cu2+). 5. Pada uji warna dengan Xantoprotein didapatkan hasil positif dengan terbentuknya larutan kuning. 6. Pada uji warna dengan molish didapatkan hasil positif dengan terbentuknya cincin unggu antara lapisan bawah dengan atas.

DAFTAR PUSTAKA. Fessenden, Ralph J dan Joan S. Fessenden. 1989. Kimia Organik edisi ketiga. Jakarta: Erlangga. Parman, Sanjaya. 2007. Kandungan Protein dan Abu Tanaman Alfaalfa (Mediga sativa L) setelah Pemupukan Biorisa. Bioma vol. 9: hal. 38 – 44. Poedjiadi, Anna, dan F.M. Titin Supriyanti. 1994. Dasar-dasar Biokimia. Jakarta: UIPress. Wirahardikkusumah, Muhammat. 2008. Biokimia. Bandung: Penerbit ITB.

About these ads

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s